




柱层析技术
溶剂的选择
选择一个合适的溶剂系统是柱层析分离的关键。在选用柱层析洗脱剂时首先要考虑三个方面的因素:溶解性 ( Solubil2ity)、亲合性 (Affinity)和分离度 (Res oluti on)。溶剂应选择价廉、安全、环保的 ,可以考虑、、、、和正己烷等等。但正己烷价格较高 ,很易挥发 ,和与硅胶的吸附是一个放热过程 ,易使柱子产生气泡。其他的溶剂用的相对较少 ,要依不同需要选择。另外值得一提的是 ,由于我们进行的是痕量分析 ,淋洗剂的纯度必须关注 ,一般使用残留级或 HPLC级的 ,如果是分析纯的必须进行精制。同时溶剂在过柱后回收使用 ,大孔树脂柱,一方面环保 ,另一方面也能节省部分经费。
蛋白层析柱操作流程
操作流程一般为:预处理、逆流洗柱、水洗、吸附、解吸和再生
1.预处理:在吸附树脂的生产过程中,一般采用的是工业级原料,产品没有经过进一步纯化处理,大孔树脂柱供应,树脂内部残留少量单体,大孔树脂柱生产厂家,所以在使用之前,需用水溶性溶剂对其浸泡处理,然后用去离子水通过树脂层,置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。
2.逆流洗柱:用水洗出去水离子及破碎填料,树脂装入后,用蒸馏水反洗树脂层,直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层,至出水呈中性为止。
3.水洗:水洗的主要目的是除去所附着的渣滓。
层析的原理
凝胶过滤 凝胶过滤又叫分子筛层析,其原因是凝胶具有网状结构,小分子物质能进入其内部,大孔树脂柱生产商,而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。 四、 亲和层析 亲和层析的原理与众所周知的抗原一、一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似,每对反应物之间都有一定的亲和力。
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