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小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立

细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞，采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测，并进一 步采用RT- PCR对破骨细胞标志酶***基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和***蛋白酶K (Cathepsin K )的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP(+)多核细胞形成13天TRAP(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现，随着培养时间的延长，陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志***TRAP在共培养3天时开始表达，而MMP-9和Cathepsin K则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力，该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.

大鼠脂肪的分离

 将***切取的大鼠脂肪***尽量剪碎后移至离心管，其余步骤与人脂肪的分离一致。

 经***切除获得的大鼠皮下脂肪***消化后原代培养24 h，且肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜，轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落，镜下观 察发现大部分细胞都附着于这层膜上，通过术获取的人脂肪***消化后则无此现象。增加胶原酶的量和消化时间也无法避免，细胞实验外包选哪家，取材时的或脂肪间结缔***未被完全消化，穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。胶原蛋白酶虽然可以特异性水解胶原蛋白的三维螺旋结构，但不会损伤其他蛋白质。处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 消化5 min。然后利用40 μm的细胞筛过滤后传代。 根据作者的经验，每毫升***切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞，40 h后传代时约剩余 6.2×10^6个细胞，细胞剩余率27%。

细胞培养中常见的污染及解决方法

***污染

***污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。，细胞实验外包公司，一些***类似于死细胞碎片，但其中许多清晰可见，连云港细胞实验，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像***那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。

解决方法：一旦被***污染，果断丢弃，然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。