




硅胶柱层析惯用方法
1.称量。200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是/乙酯/体系,大孔树脂柱供应,就用拌;如果洗脱剂是/醇体系,就用拌。如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大,尤其是乙酯/,如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用钠久置干燥。用无水氯化钙干燥,以除去1%的醇。如果样品对酸敏感,不能用体系过柱。
层析柱的操作方法介绍
1.吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,大孔树脂柱,填满整个柱体,不留死体积,大孔树脂柱生产厂家,密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵入溶剂,至溶剂流出止。
2.上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解,泵入中压柱柱头,然后泵入1000RID。
3.洗脱
以一定比例的一为洗脱液,60ML/MIN的流速进行梯度洗脱,柱的使用压力为2~ 3KG/C 。按每份500ML收集,TLC检识展开剂一*仿(2:8),显色剂5%香草醛乙醇液
至洗脱完全,大孔树脂柱生产商,相同流份合并,回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置,析出结晶,为冬凌草甲素。
层析的原理
聚酰胺薄膜层析 聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时,展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程,就能导致分离物质达到分离目的。
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