




蛋白层析柱操作流程
操作流程一般为:预处理、逆流洗柱、水洗、吸附、解吸和再生
1.预处理:在吸附树脂的生产过程中,一般采用的是工业级原料,黑龙江树脂柱,产品没有经过进一步纯化处理,树脂柱生产商,树脂内部残留少量单体,所以在使用之前,需用水溶性溶剂对其浸泡处理,然后用去离子水通过树脂层,置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。
2.逆流洗柱:用水洗出去水离子及破碎填料,树脂装入后,用蒸馏水反洗树脂层,直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层,树脂柱价格,至出水呈中性为止。
3.水洗:水洗的主要目的是除去所附着的渣滓。
事半功倍的不锈钢层析柱使用技巧
事半功倍的不锈钢层析柱使用技巧常用吸附剂的种类:氧化铝、硅胶、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙(镁)、淀粉、纤维素、蔗糖和活性炭等。几种常见吸附剂的特性(1)氧化铝:市售层析用氧化铝有碱性、酸性2类,粒度规格大多为100-150目。碱性氧化铝(pH9—10):适用于碱性物质(如胺、)和对酸敏感的样品(如缩醛、糖苷等),也适用于烃类、甾体化合物等中性物质的分离。但这种吸附剂能引起被吸附的醛、酮的缩合。酯和内酯的水解、醇羟基的脱水、乙酰糖的去乙酰化、***A和K等的***等不良副反应。所以,这些化合物不宜用碱性氧化铝分离。酸性氧化铝(pH3.5—4.5):适用于酸性物质如有机酸、氨基酸等以及色素和醛类化合物的分离。中性氧化铝(pH7—7.5):适用于醛、酮、醌、苷和硝基化合物以及在碱性介质中不稳定的物质如酯、内酯等的分离,也可以用来分离弱的有机酸和碱等。
层析柱的操作方法介绍
1.吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中,于105。C活化2H后,树脂柱供应,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,填满整个柱体,不留死体积,密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵入溶剂,至溶剂流出止。
2.上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解,泵入中压柱柱头,然后泵入1000RID。
3.洗脱
以一定比例的一为洗脱液,60ML/MIN的流速进行梯度洗脱,柱的使用压力为2~ 3KG/C 。按每份500ML收集,TLC检识展开剂一*仿(2:8),显色剂5%香草醛乙醇液
至洗脱完全,相同流份合并,回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置,析出结晶,为冬凌草甲素。
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