染色-南京英瀚斯生物科技-gus染色

 病理实验外包，南京英瀚斯可开展冰冻切片荧光染色1.  冰冻切片室温晾干15 min，可用含10%正常山羊的PBS室温封闭切片1小时（此步可不洗）。2.  滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液（的量视***大小而定，原则是可以均匀覆盖***面，且保证整个过程中不会使***干涸）。3.  将切片放在加了PBS的组化湿盒，室温孵育2小时或4℃过夜。4.  第二天先将湿盒放到37℃回温1 h，然后吸取片上的一抗进行回收，将切片插入到小染缸PBS冲洗。5.  滴加用PBS稀释好的二抗（避光）置于分子杂交箱中37℃孵育1小时。回收二抗，切片置于染缸内，PBS洗5 min×3次。6.  滴加DAPI工作液染核，染色，室温10~20 min（工作浓度0.1%染色15 min）。7.  回收DAPI，滴加5-10 μl 抗荧光衰减封或中性树胶，用处理干净的盖玻片封片，即可到荧光显微镜或者共聚焦显微镜下。8.  做好的片放在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周左右。

 病理实验外包，he染色步骤，病理染色常见染色介绍Von Kossa染色：简介：钙结节的形成为成骨细胞特有，Von kossa染色法是染色矿化结节的经典方法，利用与钙盐的复分解反应形成可被还原的银盐，在强光或紫外光下或者强还原剂作用下使其还原为黑色的金属银。

简要流程：石蜡切片/细胞爬片/冷冻切片→脱蜡至水→滴染→素染核→伊红染色→脱水、透明、封片（中性树胶）→Von kossa染（钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色，细胞核呈蓝色，背景呈红色；或者钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色，背景呈红色）。Von Kossa染色利用金属离子置换反应检测***中钙盐沉积，由溶液中的银离子置换***中沉积的钙离子。

该染色可用于血管钙化的检测

 病理实验外包，病理染色HE染色常见问题：Q1：HE染色常见的红蓝失调

答：

（1）偏蓝色：素染色过深，分化不够；伊红***过期；伊红染色时间太短，分化过度。

（2）偏红色：素染色过浅，分化过度；***固定不佳，细胞核不着色；脱蜡不，素染不上；素氧化成熟不够；伊红染色过深，分化不足。

Q2：HE染色后出现的大白块或斑点

答：脱蜡前烤片温度偏低，gus染色，时间过短，蜡未完全融化；切片在脱蜡溶剂中停留时间过短；脱蜡溶剂使用太久，得更新。