




层析柱详细的操作方法是怎样的?
层析柱详细的操作方法:
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例
1、吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中,于105C活化2H后,树脂柱生产厂家,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,填满整个柱体,不留死体积,密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵人溶剂,至溶剂流出止。
2、上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解,泵人中压柱柱头,然后泵人1000RID。
层析柱的操作方法介绍
1.吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,填满整个柱体,不留死体积,密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵入溶剂,至溶剂流出止。
2.上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解,泵入中压柱柱头,然后泵入1000RID。
3.洗脱
以一定比例的一为洗脱液,60ML/MIN的流速进行梯度洗脱,柱的使用压力为2~ 3KG/C 。按每份500ML收集,TLC检识展开剂一*仿(2:8),显色剂5%香草醛乙醇液
至洗脱完全,相同流份合并,回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置,析出结晶,为冬凌草甲素。
事半功倍的不锈钢层析柱使用技巧无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基在外,很容易是样品分解,特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝有碱性、酸性的,哈尔滨树脂柱,选择余地比较大,但比硅胶要贵些。听说有个方法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了,没有验证过。选择吸附剂:200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶。干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以。推荐硅胶量是样品量的30-40倍,具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分Rf在0.2-0.4,杂质相差0.1以上),就可以少用硅胶。用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话,就不容易流出。这样就会发生,后面的点先出,而前面的点后出。这时可以采用氧化铝作固定相。
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