




3、参数设置
使用488nm激发波长,525nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似,可以用FITC的参数设置检测DCF。DCF的激发光谱和发射光谱参考下图。
4、其它说明
阳性对照可以按照1:1000的比例使用。例如装载好探针的细胞共1毫升,可以加入1微升的阳性对照刺激。通常刺激后20-30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高,可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快,可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
另外,对于某些细胞,如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1:2000-1:5000稀释DCFH-DA,使装载探针时DCFH-DA的浓度为2-5微摩尔/升。探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。

分子生物学服务
公司建有100平米分子实验室,绵阳pcr,配备有PCR仪、定量PCR仪、电泳仪、恒温培养箱、恒温摇床、垂直电泳仪、蛋白转印仪、蛋白发光成像仪等设备。分子组技术人员毕业于中国农业大学、华中科技大学同济***院、浙江理工大学等高校生物***相关,dna检测,全部具有硕士研究生以上学历,熟练掌握分子生物学相关实验,可开展多种分子生物学检测服务。



二、操作步骤:
1. 所有在纯化系统里使用的溶液当日都需要经过 0.22μm 的滤膜抽滤、脱气处理;保存 4℃ 冰箱里的缓冲液若要在室温使用需***至室温后抽滤脱气;
2. 样品上柱纯化前,需先滤膜过滤,少量样品可用离心(13000rpm,10min);
3. 依次用水、缓冲液洗泵;设置流速和柱前警报压(压力值参阅层析柱及填料说明书,PCR,取较小的一个大耐受压力)。防止柱中进入气泡,***检测怎么做,影响分离效果;
4. 当柱子限压在 0.3MPa,或者在限压状态下流速很低时,pH valve 中的 Restirtor 可以切换成 Off line,即显示 By-pass 状态;
5. 当需要通过仪器上样环上样时,将 W1 阀口处换成带透明短软管的阀门,从此处阀门位通过倒吸样品上样;
6. 进样阀「Inject」为上样状态。上样结束可将进样阀切换回「Load」状态。并用纯水认真清洗上样环至少 3 次;将 W1 阀口处换回原来接头阀门。
7. 纯化结束后,用纯水清洗泵和平衡柱子;再用 20% 的乙醇清洗泵以及系统。长期不用,层析柱应保存在 20% 的乙醇中,泵放置在 20% 乙醇中;
8. 实验结束后及时倾倒废液瓶里的废液;

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