动物模型-南京英瀚斯生物科技-动物实验室

1.3改良多平台睡眠剥夺法

在MMPM 中将 10 只大鼠(具体数目可根据实际需要确定)同时放在装有 14 或 15 个台的水槽中(长 127 cm ，宽 44 cm ，高 45 cm )进行实验，这样既避免了 SP及M P中单只大鼠与群体隔离的缺点，动物模型构建哪家好，又保留了 M P 中活动范围增大的特点，因在实验时大鼠多是 3 只或 4 只一笼进行饲养，如 1 组实验需 10 只大鼠，则需要3笼或 4笼大鼠，考虑到来自不同笼的大鼠放在一起实验也可能造成群体的不稳定，有学者将实验方法进一步改良，将实验所需的 10 只大鼠放在同一只笼中饲养 2 周，实验时再将这些大鼠放在一起同时进行睡眠剥夺实验，这样以克服实验时大鼠群体不稳定的缺点，从而将实验时的不确定因素减至低! 实验研究发现在MMPM中"经采取措施保持大鼠群体稳定性及避免大鼠与群体分离后" 大鼠上腺重量%体重减轻量%中促上腺皮质(A CTH )和上腺皮质酮 (CO RT) 的含量均较M P中为低，提示M M PM 较 M P 具有更低的应激性，动物实验室，是较为理想的REM 剥夺方法。

三、实验指标区域指标开臂1停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂2停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）开臂3停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）其他臂停留时间、活动路程、进入次数、潜伏期、平均速度（X轴投影速度）四、实验方法及应用

1) 动物适应实验环境1周后，称重，禁食24小时。此后每天训练结束后限制性地给予正常食料（据体重不同，大鼠16-20g，小鼠2-3g），以使体重保持在正常进食大鼠的80%~85%。

2) 第二天，迷宫各臂及***区分撒着食物颗粒（每只4~5粒，直径约3~4mm）。然后，同时将4只动物置于迷宫***（通往各臂的门打开）。让其自由摄食、探究10min。

3) 第三天，动物模型，重复第二天的训练。这一过程让动物在没有很强的应激条件下熟悉迷宫环境。

4) 第四天起，动物单个进行训练：在每个臂靠近外端食盒处各放一颗食粒，让动物自由摄食。食粒吃完或10min后将动物取出。

5) 第五天，将食物放在食盒内，重复前一天的训练，一天2次。

6) 第六天以后，随机选4个臂，每个臂放一颗食粒；各臂门关闭，***敲除，将动物放在迷宫***；30s后，臂门打开，让动物在迷宫中自由活动并摄取食粒，直到动物吃完所有4个臂的食粒。如经10min食粒仍未吃完，则实验终止。每天训练两次，其间间隔1h以上。

难点与关键点

将灌注针插入主动脉内是灌注固定的关键，也是难点。首先准确找到主动脉，这是此步骤的要点。可用温生理盐水将胸腔内的血液冲洗干净，用镊子轻轻夹住心 外膜（夹的越少越好，以免影响取材）将心脏向左上方提起，即可看清主动脉，又可使灌注针很容易地插入主动脉内。插入时动作要慢，针尖方向不要偏向右侧，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，则将针退后、调整方向重新进针，直到进入主动脉，灌注针进入主动脉后可在心脏的上方看到其位置，灌注针进入主动脉的长度 好为 3~5 毫米，然后用丝线扎紧。切勿将灌注针放在左心室内，这样由于主动脉瓣的关闭，灌注液很难进入主动脉，而是沿着心室的切口流出，致使灌注失败。另 外，灌注针插入成功后，一定要用剪刀剪开右心耳而不是右心室，这是灌流液的出口。剪开心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注针插入右心室。