




蛋白质定量组学服务
细胞内蛋白质组丰度的动态变化对不同生命过程有重要影响。例如在许多***的发生和发展进程中,常常伴随着某些蛋白质的表达异常。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(label)策略和非标记的(label free)定量策略,PCR,其中标记策略又分为体内标记(如 SILAC、15N 标记),以及体外标记(如 iTRAQ、TMT 标记) 。
传统的基于2D双向凝胶电泳分离的蛋白质组通常可以鉴定出约1000种蛋白,pcr检测,对全蛋白质组的覆盖仅在5~10%左右,不能满足高通量定量蛋白质表达谱分析的要求。我们结合样品制备与高分辨率、高灵敏度的液相色谱-质谱联用技术,可在细胞与***类样品中鉴定直至多于10000个蛋白,上海pcr,对全蛋白质组的覆盖>60%。结合生物信息学分析,为您构建高通量蛋白质定量表达谱。
全转录组测序
全转录组是指特定***或细胞在特定状态下所有转录产物的总和,包括mRNA和各种noncoding RNA。我们知道生物体本身的转录过程是一个动态变化且十分复杂的分子作用网络,如果只是对某个单一RNA分子的研究,有时并不能准确的发现分子作用机制。而竞争性内源RNA(ceRNA)理论阐述了一种全新的转录调控模式:ceRNA(包括lncRNA、circRNA、mRNA、假***等)分子能够通过miRNA应答元件(microRNA Respe Element, MRE)竞争性地结合相同的miRNA来调节彼此的表达水平。举个例子:miRNA会导致***沉默现象发生,而如果lncRNA竞争性结合了miRNA,从而影响了miRNA***沉默功能实现。
ceRNA是目前转录调控领域的热点内容之一,通过全转录组研究能够系统性的阐述ceRNA的分子作用机制。目前对全转录组简便的方法就是构建2个测序文库分别进行测序。标准的生物信息学分析能够得到mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA各自的研究内容,靶向调控网络、ceRNA网络、共表达网络分析可以将这几种RNA联合起来分析,从而发现新的调控网络模型。去除rRNA的链特异性文库,含有的RNA信息含量十分丰富,通过测序和生物信息学分析能够得到mRNA、lncRNA、circRNA的鉴定及注释信息。不过该文库构建时会进行片段化选择从而滤掉了***all RNA的信息,所以需要另外再构建一个***all RNA文库,进行测序分析后可以得到miRNA和其他***all RNA的鉴定及注释信息。全转录组测序方案路线图如下所示:
腺病毒包装原理介绍
腺病毒是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链DNA分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。***腺病毒 已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.
腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒,遗传物质为线型 双股DNA形式。腺病毒的特点:(1)gan染范围广对人致病性低;(2)对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;(3)能有效进行增殖;( 4)病毒滴度高;(5)不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源***装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体 外***转导、体内接种yi苗、和***zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的***序列;
2.构建病毒表达载体质粒;
3.表达载体质粒和包装质粒重组;
4.gan染HEK293,包装出病毒;
5.病毒扩增、浓缩;
6.滴度测定。

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