




细胞实验介绍——细胞运动能力检测:
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。在长满的细胞培养板或者培养皿中,沿着中线使用移液器头或者其他硬物划1-3条平行的直线,细胞,去除中线的细胞,细胞在0h、12h、24h后,单细胞测序技术,观察细胞往中线迁移情况,判断细胞迁移能力。
一般流程:细胞接种培养-划痕-不同时间点拍照
细胞迁移和侵袭实验是体外模拟细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,293t细胞,将细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
一般流程:transwell小室准备-细胞接种-细胞培养-transwell小室染色-显微镜拍照
结果示例:
图 A 细胞划痕实验图;B,C 细胞迁移和侵袭实验图
细胞培养中常见的污染及解决方法
***污染
***污染后,培养基一般清澈,保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。,流式细胞技术,一些***类似于死细胞碎片,但其中许多清晰可见,看起来像珊瑚,比较容易区分。此外,它们会慢慢长出细细的黑色细丝,因为它们生长得比较慢,不像***那样容易被发现,一旦发现培养基被污染,它们将很难存活。
解决方法:一旦被***污染,果断丢弃,然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。

小鼠成骨细胞和破骨细胞共培养模型的建立
细胞之间的相互调控作用奠定基础.方法利用24 h内新生小鼠颅骨和4~8周龄成年小鼠四肢长分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,采用间接接触的培养模式将接种了骨sui单核细胞的玻片或骨片置入提前24 h接种了成骨细胞的培养皿中进行共培养.共培养-定时间后进行破 骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP染色鉴定和骨吸收功能检测,并进一 步采用RT- PCR对破骨细胞标志酶***基质金属蛋白酶.9(MMP-9)、TRAP 和***蛋白酶K (Cathepsin K )的表达进行检测结果共培养5天后可观TRAP(+)多核细胞形成13天TRAP(+ )多核细胞数目达到高峰;骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势;破骨细胞标志***TRAP在共培养3天时开始表达,而MMP-9和Cathepsin K则在共培养5天后表达结论共培养体系中成骨细胞对破骨细胞调控作用显著诱导的破骨细胞具有噬骨能力,该共培养模型可用于成骨细胞和破骨细胞之间的相互调控作用研究.
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