4. 各种细胞对冻存速度的要求也不一样；上皮细胞和成纤维细胞耐受性可能大些，－2~－3℃/ 分钟合适；胚胎细胞耐受性较小，凉山细胞，不宜太快。总之在一开始时，下降速度不能超过－10℃/ 分钟。
5. 用什么防护剂合适和用量多大，要依细胞而定，初代培养细胞用 DMSO 较好，293t细胞，一般细胞可用甘油；用量以较小为好。有人认为肤上皮细胞贮存在 20%-30% 甘油中很好。
6. 原则上细胞在液氮中可贮存多年，但为妥善起见，冻存一年后，应再复苏培养一次，然后再继续冻存。
7. 将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免
8. 注意自身的安全，对于来自人源性或病毒的细胞株应特别小心。操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心***性***例如 DMSO，并避免尖锐物品伤人等。
骨sui内皮祖细胞的分离培养
方法:使用密度梯度离
心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞，流式细胞检测结果分析，在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD133 表达情况.结果与结论:培养前4 d细胞增殖不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞，CD133+细胞占19.2%，CD34+细胞占28.7%，CD34+ /CD133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.
小鼠精原gan细胞分离富集和培养
成年小鼠gao丸中约有108个细胞，其中约有 2×104个是精原gan细胞，仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02～0.03%，精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象，先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min，用胎牛xue清终止消化，用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液，30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞，再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(CD90.2)阳性CD117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来，并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前CD117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%，CD90.2阳性细胞占28.98±4.51%， 二者都阳性细胞占8.98±2.98%，CD117阴性CD90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 CD117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%，CD90.2阳性细胞占56.98±4.51%，二者都阳性细胞占 8.20±3.98%，细胞周期，CD117阴性CD90.2阳性细胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无显著性(P>0.1)，CD90.2阳性细胞和CD117阴性和CD90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有显著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作为标志分子，percoll离心后细胞悬液经FACS分选后获得细胞纯度
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