冷冻前，首先要提前对冻存者本人做各种健康检查，同时进行筛查，包括、丙肝、支原体、衣原体、肝功能和血型检测等。然后，如一切结果无明显异常，可进行冻苏实验。每个男性对冷冻的耐受性有所不同，冷冻复苏后的存活率无法估计。因此，冻苏实验十分必要，可帮助医生预测以后生育方式的选择。冷冻与冷冻***其他***一样，就是将和冷冻保护剂的混合物吸入冷冻管内，封口后放入程序降温仪内按设定好的降温程序降温，封闭于液氮罐，从此进入了长时间的“冬眠”状态。
目前市面上常用的程序降温仪工作原理是：通过微处理器控制系统和电磁阀，控制喷入腔体中的液氮量来控制降温速率。其优点是：控温，受外界环境影响小。尤其是处理大体积样本时，快速喷入的大量液氮更易带走样本中的潜热，从而快速降温，保证更好的样本复苏活性。样品在相变过程中(液态->固态)会释放大量潜热。当潜热点出现，冻存液开始结冰时，样本开始释放热量，温度可能反而会上升。此时，就需要向腔体内迅速喷入大量液氮，全自动程序降温仪，从而快速降温，拉大温差，带走热量，使得生物样本迅速越过相变期。
细胞冷冻保存，1. 材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法：(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温：利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
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