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3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤：

1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，sigma******购买，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白质的毫摩尔数。

2. 在打开之前，平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中，天津sigma******，加入足够量浓度的生物素，一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数，对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍，或者该***也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中

3. 室温30分钟，sigma******经销商，或冰上放置2小时。

4. 用30 ml PBS预洗纯化柱，上样，加入与欲收集量相同的缓冲液，收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。

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