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硅胶柱层析和大孔树脂柱层析的区别？

大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物即非极性或极性较弱的物质，具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点.树脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附质) 之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作，使有机化合物根据有吸附力及其分子量大小可以经一定溶剂洗脱分开而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的.

硅胶柱的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.其中有微孔，对不同化合物的吸附能力不同，然后选用适当的洗脱剂进行洗脱从而达到分离.

层析柱装柱步骤流程

1.HETP计算

所用样品为1.0%N***或纯溶液，上样大约为总柱床体积的1%。对于34和50μm的填料，使用的线性流速应为30 cm/h，90μm的填料选择20 cm/h的线性流速。通过下式计算HETP:

HETP = L/N

其中L为柱床高度（cm），N为理论塔板数，N=5.54 (Ve/Wh)2；

Ve为洗脱体积（mL），树脂柱厂家，Wh峰高一半处的峰宽（mL）。

2.峰对称因子计算

洗脱峰的峰形应尽可能对称，即对称因子尽可能接近1。As按下列公式计算：

As = b/a

其中，a为峰高10%处的前半个峰宽，b为峰高10%处后半个峰宽。

一文了解亲和层析柱装柱注意事项

后一种方法洗脱时，选择一种与待分离物质有较强亲和力的物质加入洗脱液，这种物质与配体竞争对待分离物质的结合，在在适当的条件下，如这种物质与待分离物质的亲和力强或浓度较大，待分离物质就会基本被这种物质结合而脱离配体，从而被洗脱下来。例如用染料作为配体分离脱氢酶时，可以选择NAD+进行洗脱，NAD+是脱氢酶的辅酶，它与脱氢酶的亲和力要强于染料，所以脱氢酶就会与NAD+结合而从配体上脱离。

特异性洗脱方法的优点是特异性强，可以进一步消除非特异性吸附的影响，从而得到较高的分辨率。

另外对于待分离物质与配体亲和力很强的情况，树脂柱供应，使用非特异性洗脱方法需要较强烈的洗脱条件，很可能使蛋白质等生物大分子变性，有时甚至只能使待分离的生物大分子变性才能够洗脱下来，使用特异性洗脱则可以避免这种情况。

由于亲和吸附达到平衡比较慢，树脂柱，所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件，可以通过适当的改变其它条件，如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等，来缩小洗脱时间和洗脱体积。