注意事项
1. 为了避免蛋白质变性，浙江pcr，不要对样品剧烈搅动和反复冻融。
2. 缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环。。
3. 为了避免蛋白质的氧化，将 0.1～1 mmol/LDTT（二硫苏糖醇）(或 β-巯）加入到缓冲溶液中。
4. 为了避免***对目标蛋白的***，将 1～10 mmol/LEDTA 金属螯合剂加入。
5. 为了避免微生物生长，实时荧光定量pcr，使用灭菌溶液。在纯化任何一种蛋白质的时候，均必须时刻对它的稳定性注意维护，使它的活性得到保护，PCR，需要牢记如下一些通用的注意事项。
6. 尽可能置于冰上或者在冷库内进行操作。
7. 蛋白浓度不要太稀。
8. 除非是进行聚焦层。否则 pH 需要合适，防止所使用的缓冲溶液 pH 与 pI 相同，使蛋白质的沉淀得以避免。
9. 使用蛋白酶，避免蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，将 DNA 酶加入来使得 DNA 降解，避免 DNA 对蛋白的污染。
逆转录病毒构建及包装
逆转录病毒（Retrovirus）是一类RNA病毒。在逆转录酶的作用下，以病毒RNA为模板合成cDNA再通过DNA、转录、翻译等过程形成病毒颗粒。逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白表达系统，pcr检测，由逆转录病毒载体、辅助载体（表达病毒包装需要的蛋白质）和包装细胞系组成。逆转录病毒载体在外源***表达、***沉默、、生物制药等得到广泛的应用。逆转录病毒载体主要优点：转染范围广，可以各种细胞类型，转入的外源***可完全融合，对细胞率高，细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源***。
逆转录病毒载体系统共有两部分组成：包装细胞系和缺陷病毒本身。在逆转录病毒载体中，去除了正常的蛋白编码序列而保留了和包装信号，通过分子技术将目的***插入此载体上，而包装细胞系能提供病毒载体包装成病毒粒子所需的结构蛋白。当重组病毒载体导入包装细胞后，缺陷病毒载体和包装细胞的互补作用共同完成病毒装配，该病毒颗粒可其它宿主细胞，此时目的***进入该细胞并整合到细胞***组中，导致插入序列在宿主细胞中表达，产生目的蛋白。宿主细胞不能像包装细胞那样为缺失结构***的逆转录病毒提供结构蛋白，因而在宿主细胞内不会产生新的毒颗粒，保证了该载体在生物制品领域的生物安全性问题。
免yi共沉淀（Co-IP检测）是以抗ti和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质与蛋白质间的相互作用也被保留下来。用预先固化在beads上的蛋白质A的抗ti免yi沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来，再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。
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