阴性对照
为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
培养基适用性检查
微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按chu方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表1规定条件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，微生物限度，试验菌应生长良好。
抑菌效力-培养基
培养基的制备
1.胰酪大豆胨液体培养基
胰酪胨17.0克
氯化钠5.0克
大豆木瓜蛋白酶消化物3.0克
磷酸氢二钾2.5克
葡萄糖（一水合）2.5克
水1000mL
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置 20～25℃培养。
2. 胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪胨15.0克
氯化钠5.0克
大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克
琼脂15.0克
水1000ml
除琼脂外，取上述成分，混合。微温溶解，调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。
3.沙氏葡萄糖液体培养基
沙氏葡萄糖琼脂培养基照微生物限度检查法（附录ⅩⅢ C）制备。
（3）MPN法 MPN法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，微生物限度 药典，本法不适用于霉菌计数。若使用MPN法，微生物限度检查法，按下列步骤进行。
取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液至少3个连续稀释级，微生物限度检测，每一稀释级取3份1ml分别接种至3管装有9～10ml胰酪大豆胨液体培养基中，同法测定菌液对照组菌数。必要时可在培养基中加入表面活性剂、中和剂或灭活剂。
接种管置30～35℃培养3天，逐日观察各管微生物生长情况。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1～2 天，观察是否有微生物生长。根据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的***可能数。
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