世纪久海-微生物限度

3.滤膜法

滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的***数。

此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠gan菌的数目:将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠gan菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠gan菌的数目。

此法也是统计样品中活菌的数目。

4.比浊法

原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，微生物限度检测，即与光密度成正比，微生物限度，菌越多，光密度越大。因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。

5.显微镜直接计数法

在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数，我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样，可以有两种情况。

另外，微生物限度检测仪，微生物计数法发展迅速，多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。

各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：

10^1cfu：可接受的***大菌数为20；

10^2cfu：可接受的***大菌数为200；

10^3cfu：可接受的***大菌数为2000，依此类推。

若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。

稀释液、冲洗液及培养基

见非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）。

黑曲霉菌悬液：操作时关闭空调系统及洁净工作台风机。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，23～28℃培养5～7天，微生物限度，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至 ，用比浊法制成每1ml含孢子数108cfu的孢子悬液。