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当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是***、***、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室***消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。 高浓度的抗1生素和抗霉菌素可能对一些细胞系***性,因而,做剂量反应实验确定抗1生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗1生素如两1性霉1素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是我司推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤:
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假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗1体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗1体和酶标抗1体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab")或Fab片段作酶结合物的***,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响,已被列为这类***的一项考核指标(参见6.2)。
双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
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1.3.2 ***适比例
在恒定量的抗1体中加入递增量的抗原形成抗1体复合物(沉淀)的量见图1-4。曲线的高峰部分是抗原抗1体比例合适的范围,称为等价带(zone ofequivalence)。在等价带前后分别为抗1体过剩带和抗原过剩带。如果抗原或抗1体极度过剩,则无沉淀物形成,在***测定中称为带现象(zone phenomenon)。抗1体过量称为前带(prezone),抗原地过量称为后带(p1ostzone)。在用***学方法测定抗原时,应使反应系统中有足够的抗1体量,否则测得的量会小于实际含量,甚至出现假阴性。
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