新繁殖的微生物及其释放出的***有味气体和大量***代谢物和碎片——这之中有很大一部分是***过滤器不能阻挡的，于是就构成了微生物二次污染。软接头也是微生物二次污染一个重要来源，这是因为软接头通常不保温，结露就在这里发生。对***洁净室来说，即使是少量软接头也必须采取双层或保温软接头的措施。后，组合式空调机组所有接缝处都应作密封处理，表冷器凝结水排水管上设水封，以保证空调器密闭不漏风。
***室处于负压状态，外面的空气则会不断从门下面流进房间，同时防止房间内滋生的气态污染微粒逸出，进入外面的走廊。举一个常见的负压室例子，一间带排气扇的浴室就是一间负压室。负压条件形成后，关闭浴室门，风扇就会阻止不好闻的味道和湿气逸出浴室。要产生负压状态，可通过平衡房间的通风系统，让自动排放的空气多于自动提供的空气即可实现。这样就造成通风不平衡，房间通风系统不断从房间外面吸进空气补充。在一间经过精心设计的负压室里，空气完全通过门下面的一个缝隙（一般大约半英寸高）流入。
除该缝隙外，这间负压室应该尽可能密封，以防止空气通过各种其它裂缝和缝隙进入，例如窗户四周的各种缝隙，墙上照明设备以及插座等。即使房间已经实现了负压条件，这些地方漏进的空气仍可能抵消或者消除房间的负压状态。
实现和维持房间负压以便空气流进房间所需的压力差非常小（水位表的0.001英寸）。实际实现负压值取决于通风系统空气消耗量与供应量的差额及房间的结构和大小，包括空气流动路径和流动开口。如果房间密封情况良好，则很容易实现高于0.001英寸水位表的负压值。但如果房间密封情况不佳，正如很多卫生机构的实际情况（特别是较旧的机构），要实现较大的负压值可能需要排放量/供应量差值大于通风系统容量。
