武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的高新技术公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、***、细胞等生物实验。
多胺作为一种多聚阳离子,在***表达、蛋白活性等多层面调节细胞功能。多胺转运蛋白能够特异性介导多胺类物质跨膜运输,在调节多胺浓度、调控抗性***表达、维持mRNA水平、增强植物抗逆性等方面具有重要功能。目前,已知拟南芥(Arabidopsis thaliana)LHR1***编码质膜多胺转运蛋白AtPUT3,控制多胺的吸收,参与植物热胁迫早期反应中的分子调控过程,但水稻中(Oryza sativa),多胺参与植物热胁迫早期反应的具体分子机制尚不明确。通过序列对比,发现水稻Os02g47210和Os03g37984是拟南芥AtPUT3的功能同源***。为了初步阐明水稻多胺转运蛋白LHR1在热胁迫早期防御反应及提高植物耐热性上的功能,本研究利用生物信息学、生化与分子生物学实验、遗传学等手段对水稻LHR1同源***的功能进行初步研究,结果如下:1.了水稻OsLHR1(Os03g37984.1、2、3和Os02g47210)***全长CDS,并对该***编码的蛋白质进行有效的生物信息学分析,结果显示:Os03g37984有5种不同的剪切方式,编码5种OsPUT3蛋白。
胞质Ca~(2 )是重要的第二信使,通过Ca~(2 )结合蛋白产生磷酸化信号级联,调控下游***表达。钙依赖而钙调素不依赖的蛋白激酶(calcium-dependent/calmodulin-independentprotein kinases,CDPKs)是一类仅在植物和部分原生生物中存在的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在钙信号转导中具有重要功能。越来越多的证据表明,CDPKs广泛参与植物生长发育、病原防御、非生物环境胁迫等生理反应的信号传递过程。目前在水稻中已发现31个CDPKs***,但功能明确的只有少数几个***,本研究的目的就是利用超量表达和RNA干涉(RNA interference,RNAi)技术分析水稻OsCPK2、OsCPK15和OsCPK29的功能,为利用***工程技术培育水稻新品种提供新的***资源和理论指导。本研究的主要试验结果如下: 1.通过RT-PCR方法检测了OsCPK2、OsCPK15和OsCPK29三个***在粳稻品种日本晴分蘖期的根、成熟叶片、穗尖至剑叶叶枕距离分别为0 cm、0-1cm、1-3 cm、3-5 cm、5-8 cm、8-12 cm、12-16 cm、16-20 cm、20-25 cm、25-30 cm、灌浆期稻穗(命名为P1-P12)中的表达谱。试验结果显示:OsCPK2和OsCPK29时期稻穗中表达量较高,在成熟叶片和P12时期稻穗中表达量很低,在分蘖期的根和幼穗中不表达;而OsCPK15在所检测的各个***和时期中表达量均很高。
CaNZ是CaN(Calcineurin)***的正义表达***,是在真核生物中存在的一个Ca2 及CaM依赖的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它包括一个催化亚基calcineurin A和一个Ca2 结合亚基calcineurin B,其催化亚基calcineurin A活性受CaM调节。本实验在筛选***再生体系基础上,利用带有信号肽和CaM结合肽的载体,以农为媒介将CaN***导入中,预期过表达的融合蛋白将会被分泌到细胞外并与质外体CaM相结合,***质外体CaM的功能,从而构建出质外体CaM的反义植株,观察质外体CaM反义植株的表型改变,为进一步开展CaM在植物生长发育过程中的功能研究提供基础。 研究结果如下： (1)以14-16d叶片为外植体,以MS为基本培养基,通过附加配方对比,筛选出适合材料再生的培养基配方：MS IAA 0.5mg·L-1 6-BA 1.5mg·L-1为芽分化的培养基,1/2MS NAA0.1mg·L-1为生根培养基。 (2)用Kan进行叶片抗性筛选。当Kan浓度小于50mg·L-1时,叶片能正常分化出芽；当Kan浓度为75mg·L-1时,叶片大多数白化；当Kan浓度超过100mg·L-1时,芽分化停止。所以,以Kan浓度100mg·L-1为叶片分化芽抗性筛选的临界浓度；而培养物根对较为敏感,Kan 50mg·L-1为筛选临界值。