电泳实验技术原理
电泳实验的技术原理
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电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。
带电颗粒在电场中泳动的速度称迁移率或泳动度。
电泳时，带电颗粒（球形）在介质中受力平衡匀速运动，则有：
v = F阻/f = FE/f = E·q/f = E·q/(6π·r·η)
v — 泳动度 F阻 — 颗粒所受阻力
E — 电场强度 q — 颗粒所带电荷
r — 颗粒半径 η — 介质黏度
FE — 颗粒所受电场力 f — 摩擦系数
由上式可见：泳动度与球形分子半径、介质粘度、颗粒所带电荷以及电场强度有关。 非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动度与粒子形状有关。
SDS-PAGE电泳
蛋白质在SDS-PAGE电泳中，迁移率只和其分子量相关
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PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。不连续的凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。
蛋白电泳问题处理
蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法
1：“微笑”(两边翘起中间凹下)形带，主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所
致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。
2： “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带
主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
处理办法：在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。
3：出现拖尾现象?
主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液；电泳缓冲液时间过长，重新配制
4：电泳的条带很粗?
电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩的原因。
处理办法：适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压
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