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电泳槽配置

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电泳槽一般分为三部分：1，电泳槽外壳；2，电泳槽主体；3，电泳槽附件。电泳槽外壳一般使用进口的优质PC料，透明度高，耐高温，贵州Western blot，便于观察。电泳槽主体是电泳槽的核心部分，用来承载电泳凝胶，Western blot厂家，形成含有正负极的直流电场，从而能让样品在凝胶内分成电泳条带，终实现样品的电泳分离。电泳槽附件主要有：凝胶玻璃板、加样梳、制胶器、凝胶托盘、电泳槽导线等，从用途和样品性质来说，电泳槽主要分为：蛋白电泳槽、蛋白转印电泳槽和核酸电泳槽三大类别。

核酸电泳常用染色液

1、***化乙锭（ethidium bromide， EB）

较为常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min，使非结合的EB褪色，Western blot价格，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。

2、***橙（acridine orange， AO）：

***橙可嵌入双链核酸碱基对之间，Western blot生产厂家，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但***橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。

3、亚甲蓝（methylene blue）

可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为 250ng。

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蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法

1：“微笑”(两边翘起中间凹下)形带，主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所

致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。

2： “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带

主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。

处理办法：在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。

3：出现拖尾现象?

主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。

处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液；电泳缓冲液时间过长，重新配制

4：电泳的条带很粗?

电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩的原因。

处理办法：适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压

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