




核酸电泳凝胶的摄影与净化处理
1.凝胶摄影
需配置分辨率较高的照相机,照相机固定架,近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。
操作需在暗室进行,将相机固定好,把凝胶放在紫外检测仪上适当位置,调焦,安徽Western blot,装上红色滤光片,Western blot公司,按常规拍照。
亦可使用凝胶自动处理系统,但仪器费用较高。
2.EB溶液的净化处理
由于EB具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害***健康。
(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液,可如下处理:
①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;
②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,置室温数小时;
③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。
(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:
① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
转印电泳
转印电泳的分类及注意事项:
Western Blotting(蛋白质单项电泳后印迹转移)
Eastern Blotting(蛋白质双向电泳后印迹转移)
Southern Blotting(DNA印迹) Northern Blotting(RNA印迹)
在转印过程中要控制温度 ,在低温或者冷循环条件下进行
对于分子量大于100KD的蛋白质大分子不用半干转
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电泳槽密封条漏液的原因与处理(垂直槽)
一般情况下,电泳槽较窄的密封条不易漏夜,反之较宽的则比较容易漏,发现电泳槽漏液时要检查:
1、密封条是否老化或损坏,若已经老化或损坏,应更换密封条。
2、如果密封条完好无损,Western blot厂商,目测检查密封条是否有凹凸不平现象,Western blot生产厂家,如果有应将密封条拆下进行重新安装。安装时注意不要拉扯密封条,使其自然地嵌入密封槽内,并保证安装均匀,避免密封条出现凹凸现象。
3、如果缓冲液是从密封条的中间漏出,则说明漏处比两边凹(不在同一水平线上),我们则需要把密封条拆下,清理干净槽内胶粘剂,然后再将薄厚相当的窄边条(如0.4毫米)粘在槽内,以垫起凹下的密封条,使其与两边保持一致,此后再将密封条粘在槽内即可。
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