电泳槽配置
电泳槽配置
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电泳槽一般分为三部分：1，电泳槽外壳；2，电泳槽主体；3，电泳槽附件。电泳槽外壳一般使用进口的优质PC料，透明度高，耐高温，便于观察。电泳槽主体是电泳槽的核心部分，用来承载电泳凝胶，形成含有正负极的直流电场，从而能让样品在凝胶内分成电泳条带，终实现样品的电泳分离。电泳槽附件主要有：凝胶玻璃板、加样梳、制胶器、凝胶托盘、电泳槽导线等，从用途和样品性质来说，电泳槽主要分为：蛋白电泳槽、蛋白转印电泳槽和核酸电泳槽三大类别。
核酸电泳染色液
核酸电泳常用染色液
1、***化乙锭（ethidium bromide, EB）
较为常用的核酸荧光染料，可嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光，比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍，因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深，可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min，使非结合的EB褪色，这 样可检查到10ng的DNA样品，EB也可用于检测单链DNA或RNA，但其对单链核酸的亲和力相对较小，荧光产率也相对较低。
2、***橙（acridine orange, AO）：
***橙可嵌入双链核酸碱基对之间，在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光；还通过静电与单链核酸的磷酸基结合，在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸，灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但***橙的染色操作要求严格，应在 22℃，0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中避光浸泡30min，然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。
3、亚甲蓝（methylene blue）
可将RNA染成蓝色，但灵敏度不高，而且操作时间长。染色过程：胶浸泡于0.02%的亚甲蓝，10mmol/L Tris-Ac（pH8.3），4℃放置1~2h，用净水洗5~8h（反复换水），带型肉眼可见，较低检测量为 250ng。
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核酸电泳技术介绍
核酸电泳技术介绍
凝胶电泳分离核酸的基本原理凝胶电泳是分子生物学中鉴定、量化和纯化核酸的常用实验技术。 因其速度、简便性和通用性，该方法广泛应用于核酸的分离和分析。 采用凝胶电泳法，可在几分钟到数小时内分离出约0.1 - 25 kbp范围内的核酸，且可高纯、***地从凝胶中回收分离的核酸。
该项技术主要，在大小、电荷和结构的基础上，将电场施加于带电分子混合物上并引起迁移。 中性至碱性pH值(图1A)范围内，核酸中核苷酸骨架上的磷酸基团带负电。 因此，每个核苷酸携带一个净负电荷，即，一个核酸分子的总电荷与核苷酸的总数或它的质量成正比。 换言之，DNA或RNA分子的荷质比是恒定的。 因此，它们在凝胶电泳中的迁移率主要取决于其大小（结构可比较时）（详细了解 核酸结构如何影响迁移）。 因此，当受到电场作用时，核酸从负极（阴极）向正极（阳极）迁移，较短的碎片比较长的碎片移动得更快，导致基于尺寸的分离。
