




影响电泳快慢的重要因素
影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物
电泳实验多在固体支持物上进行,使样品中的不同组分形成不同的区带,称区带电泳。电泳结束后,支持物可以方便地进行染色等后续处理。
对支持物的一般要求是均匀,吸附力和电渗小,机械性能好,便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶,琼脂糖凝胶、滤纸,醋酸纤维素薄膜等 , 支持物性质不同也会影响泳动速率,如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔,在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快,反之则慢。
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琼脂糖水平电泳槽
琼脂糖水平电泳槽实验操作
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1. 根据电泳需要,配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度,在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中,加入准确称量的琼脂糖粉。
注意:总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意:必须保证琼脂糖充分完全溶解,否则,会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4.使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入EB溶液使其终浓度为0.5ug/ml,并充分混匀(EB为***品,不提倡使用)。注意:EB是一种致***物质。使用含有EB的溶液时,请戴用手套。EB在可见光下会分解。
5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5-8 mm 之间。
注意:不要产生气泡,溶液温度太高(gt;60℃),会使得水分
过分蒸发,改变凝胶离子浓度,影响电泳效果。
6.在室温下使胶凝固(大约30 分钟),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注意:凝胶不立即使用时,用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存,或者放在制胶的缓冲液中,一般可保存2~5 天。
那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢?
那么哪些地方可能会导致漏胶或者漏液这种问题呢?
1. 玻璃板侧方或下方不小心因磕碰受损,这样玻璃板受损处则不再平整,液体会从这些部位漏出。这种情况下只能更换玻璃板,而很多垂直槽的玻璃板和边条压片是粘在一起的,这种情况则需要一起更换。
有时由于清洗不到位,边条压片表面会有污物凸起,也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。
2. 两侧的夹扣变松,或有些厂家的夹扣为了防止漏液,设计的很紧,时间长之后,玻璃板被挤压变形,密封性下降。这样玻璃板也会从两侧漏胶。
3. 底座的胶垫老化、变形或错位,玻璃板底部会发生漏胶。
4. 桌面不平整,玻璃板上夹具时不容易放正,玻璃板安装到夹具上时是相对于底座橡胶垫倾斜的,这样玻璃板底部会发生漏胶。
以上就是为大家介绍的全部内容,希望对大家有所帮助。如果您想要了解更多电泳槽的知识,欢迎拨打图片上的***联系我们。
