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理论上仪器检测出这两个孔的信号值应该是完全相同的,因为刚开始的时候样品是完全一样的。但实际上,由于移液器加样存在误差,耗材孔间不同等一系列差异,这两孔检测出的信号值并不相同。幸运的是,我们在两个孔中都加了相同的 ROX?,而我们的仪器也同时读取了 ROX? 的信号值。可以看到,ROX? 信号和 qPCR 反应荧光信号都有差异。仔细思考大家会发现,反应本身的这些物理差异会对 ROX? 信号和 qPCR 反应的荧光信号造成同等程度的影响。重要的是,我们的仪器会在每一个循环中检测每一个反应孔的这两种信号,然后在反应结束后自动进行均一化处理。结合仪器自身的一系列荧光校准参数,终您的数据精度会得到显著提高。顺便提一下,终这个值也就是我们所说的 Rn 值,也表示报告基团的标准化荧光值。






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ROX? 有什么用呢?
其实,在 qPCR 反应中有许多反应本身的物理因素会影响信号检测,从而造成孔间数据的差异。例如:PCR 反应板本底信号不均一,PCR 管盖厚度有差异,同一反应体系在分装时出现了差异等因素。ROX? 能帮助我们通过均一化校正消除这些因素的误差,从而提高数据性。
ROX? 的工作原理:
请大家注意看板上的两个孔,我们在每个孔中加入「完全等量」的样本,然后进行扩增。30 个循环完成了。在每一个循环中,我们的仪器都会读取出一个荧光信号值。

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两个关于 ROX? 的***:
,除非有些特殊情况,Applied Biosystems? 提供给您的荧光定量预混液已经包含了浓度的 ROX?,因此您无需再额外添加。
第二,所有 Applied Biosystems? 实时荧光定量 PCR 软件是默认检测 ROX? 并使用均一化数据,这会帮您提高数据性。如果您选用的***盒或者预混液不含 ROX?,依据您对实验的精度的要求不同,广州威泰克,您可以另外采购 ROX? 摸索浓度优化实验,您也可以将参比荧光染料选项改为 None(无),放弃 ROX 校正。在没有 ROX? 存在的情况下,我们建议选择参比荧光为 None 进行数据分析。
分子生物学、细胞生物学、学,申请写作,SCI润色。

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