默沙克生物科技-ELISA***盒供应商

武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。

3、 细胞培养上清

取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

4、 细胞裂解液

1） 吸去培养板内的培养基，ELISA***盒供应商，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。

2） 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

3） 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑1制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。

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　4）加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗1体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗1体的来源为抗血1清，包被和酶标用的抗1体***1好分别取自不同种属的动物。如应用单克1隆抗1体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗1体一起保温反应，作一步检测。

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2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

5. 加酶：每孔加入酶标***50μl，空白孔除外。

6. 温育：操作同2。

7. 洗涤：操作同4。

8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B050μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转***）。

10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。