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实验目的
植物细胞和***培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的***培养技术,加深对无菌操作的了解。
二.实验原理
植物的性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的性。
植物***培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物***培养按其原始意义,就是指愈伤***培养。但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器1官、***、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器1官的、***的、细胞的和原生质的培养技术。⑵在双目解剖镜下,用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥,用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fab)。每个Fab都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称Fc段,无抗1体活性,但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个Fab双体,称F(ab")2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似Fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
IgM是由五个单体组成的五聚体,含 10个重链和10个轻链,具有10个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000,IgG分子量约为150000。
④ 另取洁净的载玻片,捞起展开的切片,使其位于切片1/3处,另一端(磨边,粗糙的一端)磨面上标记或贴上标签,放于切片架上。
10. 脱蜡复水
将温箱温度调至65℃,待温度控制在60℃时,将切片连同切片架放入干燥的温箱内3-5小时至蜡熔化。
之后,石蜡切片经脱蜡透明Ⅰ、Ⅱ脱蜡各20min,勿动(防治***掉)此步为关键步,请轻拿轻放。然后放入100%、95%、90%、80%、70%各级酒精溶液中各5min
11. 染色
切片放入苏1木1精中染色约10-30min。
染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低,适当缩短或延长。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬季室温低时可放入恒温箱中染色。