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但是这种特异性也不是绝1对的。(3)半衰期不同:BNP的半衰期是22分钟,而NT-proBNP的半衰期为120分钟。假使两种化合物有着部分相同的结构,在抗原抗1体反应中可出现交叉反应。例如:绒毛膜促性1腺激1素(hCG)和黄体生成激1素(LH)均由α和β两个亚单位组成,其结构的不同处在β亚单位,而两者的α亚单位是同类的。用hCG***动物所得的抗血1清中含有抗α-hCG和抗β-hCG两种抗1体,抗α-hCG抗1体将与LH中的
α酶位发生交叉反应。目前市场上的ELISA***盒质量参差不齐,如何去挑选适合自己的***盒就显得特别重要,具体有以下几点可供参考:一、特异性ELISA***盒的特异性与***盒的关键组分,抗1体对有关,若抗1体对中之一为多抗,另一个必须为单抗,建议使用双单抗。在临床检验中,如用抗hCG抗血1清作为妊1娠诊1断***检定尿液中hCG,只能用于hCG浓度较高的试验,否则妇女生理性排泄入尿液中的微量LH将与之发生交叉反应。因此在作为早1孕诊断(敏感度应达到50mIu/mlhCG)的实际中必须应用只对hCG特异的抗β-hCG,以避免与其它激1素的交叉反应的发生。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。(4)无菌水四.实验步骤豌豆苗的茎尖培养⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株,简取1厘米左右的茎尖,浸入70%的酒精中1分钟,再浸入饱和次氯1酸钠溶液中消毒15分钟,(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次,在灭菌的滤纸上吸干水分,放入灭菌的培养皿中。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗1体夹心法测抗原的另一注意点是类风1湿因子(RF)的干扰。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。RF是一种自身抗1体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗1体夹心法检测的血1清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗1体和酶标抗1体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab")或Fab片段作酶结合物的***,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗1体夹心法ELISA***是否受RF的影响,已被列为这类***的一项考核指标(参见6.2)。
双抗1体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
4)加底物显色。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬季室温低时可放入恒温箱中染色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗1体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗1体的来源为抗血1清,包被和酶标用的抗1体***1好分别取自不同种属的动物。如应用单克1隆抗1体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗1体一起保温反应,作一步检测。