武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品，服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
3、 细胞培养上清
取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
4、 细胞裂解液
1） 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2） 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
3） 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑1制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
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2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶标***50μl，空白孔除外。
6. 温育：操作同2。
7. 洗涤：操作同4。
8. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，IgA ELISA***盒，再加入显色剂B050μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
9. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转***）。
10. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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1. ELISA的原理
ELISA的基础是抗原或抗1体的固相化及抗原或抗1体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗1体仍保持其***学活性，酶标记的抗原或抗1体既保留其***学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗1体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗1体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗1体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗1体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了***反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
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