制备液相色谱基础知识一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相( phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
色谱法早是由俄国植物学家茨维特(Tswett)在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。***液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，制备液相，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。也称现代液相色谱。
HPLC的特点和优点
HPLC有以下特点：
高压—压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米为75 Kg/cm2以上。
高速—流速为0.1~10.0 ml/min。
***—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
堵”的原因之一：纯水中的***污染首先我们要认识到，一般的国产甲1醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统的过滤头上排除，真正容易引起问题的，是水中的***。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些***虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的***污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。
有两种方式推荐：
（1）的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。缺点就是价格不菲。
（2）成箱购买市售纯净水，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下***平板实验，待菌落数合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很方便。每次成本2元左右。这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到后一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质量，这一步完全可以也应当去除。
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