




核酸电泳凝胶的制备和电泳步骤
操作方法如下:
(1) 根据所需要的凝胶的大小将相应的凝胶托盘按正确位置放置在制胶器内;
(2) 称取适量琼脂糖,置电泳缓冲液中,加热使琼脂糖溶解;
(3) 待溶液冷至60℃,加入10mg/ml EB贮存液,使终浓度达0.5mg/ml;
(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳,将琼脂糖溶液倒入胶模中,厚度约3-5mm,注意避免产生气泡;
(5) 凝胶完全凝固后,移去梳子和透明胶,将凝胶放入电泳槽。加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm;
(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后,加入样品槽中;
(7) 接通电源,使样品槽在负极端,用1-5v/cm的电压,电泳适当时间;
(8) 电泳结束后,可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察,小型蛋白电泳槽厂家,并拍照记录,也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟,小型蛋白电泳槽,再如上观察和拍照,记录结果。
电泳技术发展简史
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1809年俄国物理学家Рейсе首先发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。
1909年Michaelis首先将胶体离子在电场中的移动称为电泳。
1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进,小型蛋白电泳槽公司,创造了Tiselius电泳仪,建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法。
1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法,对氨基酸的分离进行过研究。
从本世纪50年代起,特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后,开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。
1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质,创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳,极大地提高了电泳技术的分辨率,开创了近代电泳的新时代。30多年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生***学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用较普遍,分辨率较高的分析鉴定技术,是检验生化物质的较高纯度:即"电泳纯"(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法,至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的之后、较准确的手段,即"Last Check".
由80年***展起来的新的毛细管电泳技术,是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展,己受到人们的充分重视。
为啥用琼脂糖呢,因为他有很多优点奥!
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琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致,凡是能***氢键的因素都能导致凝胶性的***。琼脂糖具有亲水性,小型蛋白电泳槽多少钱,并几乎完全不存在带电基团,对敏感的生物大分子很少引起变性和吸附,是理想的惰性载体。天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含***根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之***根可与某些蛋白质作用而影响电泳速度及分离效果。这也就是琼脂糖比琼脂贵那么多的原因了。
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