龙方科技-Western blot

什么是电泳

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分子生物学中，电泳是应用广泛的技术，从首代***测序技术的发明，到各种DNA分子以及蛋白质的分离、鉴定，无不用到了电泳。

顾名思义，电泳就是在某种介质中，通过电流使物质像游泳一样移动，在生物学对电泳的明确定义是带电粒子在电场的作用下，向相反的电极移动，并利用带电粒子在电场中迁移速度不同以达到分离目的的技术。简单来说，电泳就是将DNA或蛋白质在电场中通过介质的分子筛效应将不同分子量的分子进行分离的技术。

电泳用琼脂糖多为粉状物，不带电荷，凝点30°C，略高于室温，使用时需现用现配，溶质需和电泳时所使用的电泳缓冲液液一致；配置琼脂糖凝胶时，Western blot多少钱，会有专门的制胶板(图1)和梳子(图2，用来预留点样孔)来制作凝胶块，配置凝胶时会加入荧光染料(部分荧光染料会有微毒，使用时应小心谨慎！)，免去电泳后染色的步骤。

核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用***化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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电泳技术与病毒

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不同大小的蛋白质和核酸可以通过聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳分离开来。在多数电泳技术中，每一种蛋白质或者核酸会形成一个条带。电泳技术的原理在于不同分子量的分子在凝胶中移动速率不同。将大小未知的蛋白质或者核酸分子在凝胶中的位置与相同凝胶中大小已知的分子比较，就能估计未知分子的大小。SDS-PAGE是在聚丙烯酰胺凝胶中在SDS去污剂存在情况下屏蔽掉蛋白质带电不同，Western blot，从而估计蛋白质分子量。

复杂的病毒成分可以按照双向电泳进行分离，即先按照蛋白质等电点进行分离（等电聚焦电泳），再依据蛋白质分子量进行第二向的分离（SDS-PAGE）。

核酸或者蛋白质经过电泳分离的谱型可以通过将其从凝胶上转移（印迹）到一层固相膜上。如果转移的是DNA，就叫sourthern印迹技术，Western blot供应商，用以纪念它的发明者Edwin Southern；如果是RNA分子，就叫Nouthern blot，如果是蛋白质分子就是Western Blot。