




菌株的分离[14-15]:先取1 mL醋醅样品加入9 mL灭过菌的生理盐水中,然后依次做梯度稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6,然后用灭过菌的移液管各浓度吸取100 μL醋醅移至培养基上,在37 ℃的恒温培养箱中培养24~36 h后,观察单菌落,挑取不同形态、大小的单菌落进行划线纯化,3次分离纯化之后,对菌株进行革兰氏染色镜检,并确定菌株形态,将镜检菌株接种在MRS液体培养基里于试管中进行传代培养到20代,置于4 ℃冰箱保存,微生物菌剂厂,备用。

解淀粉芽孢***在果蔬保鲜上的应用
解淀粉芽孢***在果蔬保鲜上的应用
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菌株的鉴定:对筛选得到的乳酸菌进行16S rDNA序列分析,确定其种属。将活化好的菌液,进行菌株的全***组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)的提取[16],然后对***组DNA的16S rDNA区域进行PCR扩增,上游引物27F序列5′-AGAGTTTGATCCTGGCCTCA-3′,下游引物1492R序列:5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′,扩增片段为1 500 bp。PCR体系50 μL:10×buffer 5 μL;脱氧核糖核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate, dNTP) 5 μL;上游引物(25 μmol/L)0.5 μL;下游引物(25 μmol/L)0.5 μL;Taq DNA 聚合酶(250 U)0.5 μL;模板DNA 1.5 μL ;ddH2O 37 μL。PCR扩增条件为:95 ℃ 3 min;95 ℃ 10 s;55 ℃ 30 s;72 ℃ 1 min;72 ℃ 5 min,2~4反应步骤进行30个循环。扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测其纯度及浓度,将达到测序要求的扩增产物送至上海华大***进行测序,将测序结果在美国国立生物技术信息中心(national center for biotechnology information, NCBI)上BLAST进行比对,并确定其种属。

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