




武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、***学***盒、生化***、ELISA***盒、分子生物学***等多用途多属种的高品质产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、***学等生命科学领域。
实验目的
植物细胞和***培养的技术性强,要求无菌操作,GH ELISA***盒,通过本实验可初步掌握常规的***培养技术,加深对无菌操作的了解。
二.实验原理
植物的性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的性。
植物***培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物***培养按其原始意义,就是指愈伤***培养。但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器1官、***、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器1官的、***的、细胞的和原生质的培养技术。
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2. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
3. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶标***50μl,空白孔除外。
6. 温育:操作同2。
7. 洗涤:操作同4。
8. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B050μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
9. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转***)。
10. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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1. 在无抗1生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2. 分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗1生素加入到每一个孔中。例如,两1性霉1素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3. 每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4. 确定抗1生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗1生素的培养液培养细胞2~3代。
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