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蛋白电泳中蛋白样品的分子结构

蛋白质分子结构可以分为4级：

一级结构：组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。

二级结构：依靠不同氨基酸之间的C=O和N-H基团间的

氢键形成的稳定结构，主要为α螺旋和β

-折叠，β-转角，无规卷曲

三级结构：通过多个二级结构元素在三维空间的排列

所形成的一个蛋白质分子的三维结构。

四级结构：用于描述由不同多肽链（亚基）间相互作

用形成具有功能的蛋白质复合物分子。

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蛋白质进行PAGE时，常用垂直板电泳。

垂直板电泳的优越性有：

a.表面积大而薄，便于通冷却水以降低热效应，条带更清晰。

b.在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳，便于在同一条件下比较分析鉴定，还可用于印迹转移电泳及自显影。

c.胶板制作方便，易剥离，水平核酸电泳槽批发，样品用量少，分辨率高，不仅可用于分析，还可用于制备。

d.胶板薄而透明，电泳染色后可制成干板，便于长期保存与扫描。

e.可进行双向电泳。

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蛋白电泳常见问题及解决方法:

一，条带出现“微笑”现象（中间凹下两边翘起）

主要是凝胶中间部分的凝固不均所致，多出现较厚凝胶中，应待凝胶充分凝固后再做后续操作。

二，条带出“皱眉”现象（中间凸起两边下垂）

两板之间底部气泡所致，应排除底部气泡。

三，条带出现“拖尾”现象

主要是样品溶解效果不佳；分离胶浓度过大；电泳缓冲液时间过长。

建议：加样前离心；选择合适的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；重新配制电泳缓冲液；降低凝胶浓度。

四，条带出现纹理现象

样品中不溶性颗粒引起的。

加样前离心，水平核酸电泳槽，加适量样品促溶剂。

五，水平核酸电泳槽厂商，指示带已跑出板底，水平核酸电泳槽公司，但样品条带还未跑下来

与缓冲液和分离胶浓度有关。

更换正确PH值的缓冲液，降低凝胶浓度。六，染色背景高，染色过程中***变为蓝色