




蛋白质进行PAGE时,常用垂直板电泳。
垂直板电泳的优越性有:
a.表面积大而薄,便于通冷却水以降低热效应,条带更清晰。
b.在同一块胶板上可同时进行10个以上样品的电泳,转印电泳槽批发,便于在同一条件下比较分析鉴定,还可用于印迹转移电泳及自显影。
c.胶板制作方便,转印电泳槽报价,易剥离,样品用量少,转印电泳槽哪家好,分辨率高,不仅可用于分析,还可用于制备。
d.胶板薄而透明,电泳染色后可制成干板,便于长期保存与扫描。
e.可进行双向电泳。
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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理
核酸电泳凝胶的摄影与净化处理
1.凝胶摄影
需配置分辨率较高的照相机,照相机固定架,近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。
操作需在暗室进行,将相机固定好,把凝胶放在紫外检测仪上适当位置,调焦,装上红色滤光片,按常规拍照。
亦可使用凝胶自动处理系统,但仪器费用较高。
2.EB溶液的净化处理
由于EB具有一定的毒性,实验结束后,应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置,以避免污染环境和危害***健康。
(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液,可如下处理:
①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;
②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ,混匀,再加入等量的25mol/L HCl,混匀,转印电泳槽,置室温数小时;
③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH,混匀并废弃。
(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:
① 按1mg/ml的量加入活性炭,不时轻摇混匀,室温放置1小时;
② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。
蛋白质在SDS-PAGE电泳中,迁移率只和其分子量相关
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PAGE据其有无浓缩效应,分为连续系统与不连续系统,连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷及分子筛效应;不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应,还具有浓缩效应,故分离效果更好。不连续的凝胶作为支持介质,利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性,使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带,然后进行分离。
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