对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于使用温度10-20℃左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后，记录并观察基线。初始阶段基线应持续上升，在到达老化温度后5-10分钟开始下降，并且会持续30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到 40℃以下，尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化，不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。下面就这两分别展开讨论（流动相以甲1醇为例，色谱柱以C18为例）。
液相色谱仪维护排查主要指的是定期对仪器常用的耗材，部件进行检查、更换和维护。常见的耗材维护包括气体净化装置（除水、除氧和除烃装置）、气相色谱仪进样口进样垫（进样隔垫、***垫）、衬管、O型圈、分流部件（分流平板、毛细柱适配器）和分流捕集阱等，气相色谱仪部件维护则主要包括色谱柱的老化、FID检测器喷嘴、收集极的清洗，ECD的高温老化等。 液相色谱仪在安装时要考虑到室内的温度和湿度，控制在温度为5--35℃，湿度控制在0--85%的范围内，保持恒温、恒湿。只有这样，仪器才能发挥的性能，才能保证仪器的使用寿命。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或为流动相。
液相色谱仪的常规操作及维修： 1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3、打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。 4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。 6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7、设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a、进样前的稳流，一般2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject转换；如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值会。d、走样时间，随不同的样品而不同。 8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击trun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。
液相色谱仪维护排查主要指的是定期对仪器常用的耗材，部件进行检查、更换和维护。常见的耗材维护包括气体净化装置（除水、除氧和除烃装置）、气相色谱仪进样口进样垫（进样隔垫、***垫）、衬管、O型圈、分流部件（分流平板、毛细柱适配器）和分流捕集阱等，气相色谱仪部件维护则主要包括色谱柱的老化、FID检测器喷嘴、收集极的清洗，ECD的高温老化等。 液相色谱仪在安装时要考虑到室内的温度和湿度，控制在温度为5--35℃，湿度控制在0--85%的范围内，保持恒温、恒湿。只有这样，仪器才能发挥的性能，才能保证仪器的使用寿命。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或为流动相。
液相色谱仪的常规操作及维修： 1、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3、打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。 4、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。 6、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7、设计走样方法。点击file，选取se-lectusersandmethods，可以选有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a、进样前的稳流，一般2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject转换；如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值会。d、走样时间，随不同的样品而不同。 8、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击trun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9、关机时，先关计算机，再关液相色谱。
随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5(2~8)，太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。常用固定相有石膏、氧化铝、蔗糖、淀粉等，常用流动相为水、等各种。
正相色谱法与反相色谱法比较表
正相色谱法 反相色谱法
固定相极性 高～中 中～低
流动相极性 低～中 中～高
组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出