固定底物技术酶底物法（Defined Substrate Technology）采用大肠菌群***能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养液呈***，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。固定底物技术酶底物法可以选用国标中推荐粉状培养基（西安立科公司的酶底物***）来进行简便的操作；无需确认试验；固定底物技术酶底物法检测时间短，只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。
总大肠菌群***主要由以下4个菌属***组成：埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯菌属和肠***属。这些菌属可以在人、畜粪便中检出，有的也可以在营养丰富的水体中检出，即非粪便污染的情况下，也有检出这些***的可能性。粪大肠菌群组成与总大肠菌群组成相同，但主要组成是埃希菌属，在此菌属中与人类生活密切相关的仅有一个种，即大肠埃希氏菌；柠檬酸菌属、克雷伯菌属和肠***属所占数量较少。
酶底物法检测总大肠菌群操作简便，检测时间短，结果可靠，无需确认试验，且可以同时检测水中大肠埃希氏菌的污染状况，能够较准确地判断水样的微生物污染状况.
酶底物法检测总大肠菌群结论
①酶底物法检测总大肠菌群和大肠埃希氏菌不受实验环境是否无菌的影响。
②此方法对总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测培养温度需严格控制在35～37 ℃ 间， 温度过高或者过低都会影响检测结果。
③此方法对总大肠菌群的检测培养时间在 22～ 28 h 之间可以得到准确结果， 而大肠埃希氏菌的检测则需 24～28 h;
④无论振荡培养或者静置培养对培养结果基本没有影响。
