作为粪便污染的指示菌，大肠埃希氏菌检出的意义大，其次是粪大肠菌群，总大肠菌群的检出意义略差一些， 固定底物技术酶底物法操作简便，检测时间短，可在24小时内同时检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌的污染状况且无需确认试验；减少了传统方法中人为操作的误差，能够更准确地判断水样的微生物污染状况；作为***饮用水卫生标准的新方法，不但可以用于水样的例行检测，更可作为应急突发事件的必备***。
酶底物法测定总大肠菌群的影响因素
培养温度
总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测培养温度需严格控制在35～37℃，培养温度过高或过低均使检测结果不准确。
培养时间
总大肠菌群培养16～20 h 的检测结果与24 h相比均有显著性差异( p＜0.05)，培养22、28 与 24 h 结果差异不显著( p＞0.05)；而大肠埃希氏菌培养 16 ～22 h 的检测结果与 24 h 相比均有显著性差异( p＜0.05)，培养28 h与24 h结果无显著性差异( p＞0.05)。此方法对总大肠菌群的检测培养时间在 22～28h之间可以得到准确结果，而大肠埃希氏菌的检测则需24～28h；无论振荡培养或者静置培养对培养结果基本没有影响。
固定底物酶底物法(Defined Subsrate ?Technology， DST,以下简称DST-酶底物法）采用大肠菌群细術能产生P-半乳糖苷酶(P-D-gaUctosUlase)分解邻硝ji苯P-D-半乳吡喃糖苷0NPG(Ortho-Uropheny-p-D-gal***opyranoside)使培养液呈***，以及大肠埃希氏菌产生P-葡萄糖醛酸酶(p-glucimmidase)分解MUG使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理,来判断水样中是否含有大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群)及大肠埃希氏菌。该方法与传统多管发酵法相比具有以下优点：可以采用成品的培养基及***，操作方便;密封培养;无二次污染；实验用品易于集中无害化处理；无需确认试验;DST-酶底物法监测时间较短，18?24h即可同时判断水样中粪大肠菌群(耐热大肠菌群）的MPN值酶底物法。且多管发酵法每升水样中较低检出限为2个粪大肠菌群，而固定底物酶底物法却能***200万个异样***，准确监测到1个粪大肠菌群，具有更高的监测灵敏性和更宽的监测范围。
在现在已知的大肠***检测方法中，酶底物法是目前水中大肠***检测的***方法。这也就直观的影响到了很多检测人员对于酶底物法检测水中大肠***的方法的掌握，因为如果使用传统的多管发酵法和滤膜法的话，整体的操作过程比较繁琐，并且是试验环境要求比较高。检测时间比较长，所以酶底物法是现在追捧的检测的水中大肠***的方法。
那其实从整个客观角度来说，相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，较大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。酶底物法有商品化***供应，实验操作简便，无需确认试验，可同时检测水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌。
