




怎样选择适合你实验需要的***?
(1)样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择***合适的***,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响***的免yi亲和反应。
(2)单多ke隆***的选择。市面上的***还是以多ke隆***为主,一般单ke隆***特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多ke隆***特异性稍弱,但***的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
细胞培养在实验过程中污染的原因:
1、***:***在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感ran***的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。
2、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感ran,国内***很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛***中***常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体gan染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢凋亡。
***中可能出现的沉淀物是什么?
基于多年的实验研究,用于细胞培养的胎牛***以及其它***中可能会存在以下种类的沉 淀物:(1)纤维蛋白,它是经常出现的较大的沉淀物,可以达到 1-2mm,可以用肉眼观察到。 因为***都是在低温下进行收集和快速处理的,一些纤维蛋白原(可溶性的形成絮状纤维蛋白 的前体)在处理过程中仍然处于溶解状态,当经过***后的过滤分装后,就会在瓶中凝结出现纤 维蛋白沉淀。(2)磷酸钙,它也是常见的一种沉淀物,通常会使***出现浑浊,并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点,这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动,因此经常被误认为是微生物污染。(3)胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们 也是***中出现沉淀物的常见原因。
***解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?***中沉淀物的出现有许多种原因,但***普遍的原因是由于***中脂蛋白的变性所造成,血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在***解冻后,也会存在于***中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响***本身的品质。 若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将***分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
