细胞老化的表现：细胞折光性变差，镜下可见细胞“变薄”，做转染实验时，细胞死率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象，仍清亮。（但如果是***污染的话，一般会出现培养液的迅速变黄，混浊，镜下可见大量繁殖的***；若是支原体污染的话，细胞也会失去正常形态，会有细胞的死）。细胞的贴壁性减弱，开始有细胞漂浮于培养液中。
支原体污染预防：1.水盘为维持培养箱湿度所必需，但也成为潜在的污染源，BI的 Aquaguard-1 (货号: 01-867-1B 100ml, 稀释100倍使用) 消毒水盘效果非常好，而且不会腐蚀不锈钢，***，不挥发。2.其他实验室的水浴环境也容易造成污染，BI的Aquaguard-2 (货号: 01-916-1E 50ml, 稀释500倍使用)，可以有效消毒任何形式的水浴环境。
如何避免细胞抱团？1，用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。2，对于贴壁非常牢固的细胞（如MDCK），为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，建议分多批多次消化，这样才能大限度地将胰酶对细胞的损伤降到低，保证细胞的状态能够优。3，消化过程中不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个（因为细胞没有受力点了，所以细胞很难分散开）。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，严格控制好消化程度。
当需要进行细胞共培养、细胞趋化、细胞迁移以及细胞侵袭等研究的时候，需要在培养板上放入小室。小室内通称上室，培养板内则称下室，小室的底部有通透性的膜，一般常用聚碳酸酯膜（PC）；根据实验需求选择不同孔径的聚碳酸酯膜, 并且经过不同处理，就可以进行上述的实验。因为聚碳酸酯膜具有通透性，下层培养液中的诱导性成分或是趋化因子，可以影响到上室内的细胞功能，不同厂家对小室的命名也不同，如Transwell、Boyden chamber、Millicell或是Thincert。
