




RPA原理
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物***了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。
如何提高扩增曲线的可重复性?
A 优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板,不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同(未混匀的反应扩增效率不佳)。另外,在低温情况下存贮,重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以,20x核心反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体,不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足,在加入体系前,用户必须保证震荡后20x核心反应组分均一。
TwistDx的未来
RPA核酸检测技术被誉为可替代PCR的犀利单分子检验技术,因为其灵敏,快速,对设备要求低,操作简易等特点。自其被开发出来之后,-直被广大科研工作者津津乐道。2009年,***较大种子公司孟山都与TwistDx公司合作进行转***作物快速检测项目,旨在提高***转***作物移交转让效率。近年来TwistDx根据RPA检测特点, 通过在基础体系中填加不同酶和探针,开发出多款研发型和实用型检测产品,以实现多样化的RPA应用。