




细胞老化的表现:细胞折光性变差,镜下可见细胞“变薄”,做转染实验时,细胞死率会较高。但培养液不会发生迅速变黄的现象,仍清亮。(但如果是***污染的话,一般会出现培养液的迅速变黄,混浊,镜下可见大量繁殖的***;若是支原体污染的话,细胞也会失去正常形态,会有细胞的死)。细胞的贴壁性减弱,开始有细胞漂浮于培养液中。
支原体污染预防:1.水盘为维持培养箱湿度所必需,但也成为潜在的污染源,BI的 Aquaguard-1 (货号: 01-867-1B 100ml, 稀释100倍使用) 消毒水盘效果非常好,而且不会腐蚀不锈钢,***,不挥发。2.其他实验室的水浴环境也容易造成污染,BI的Aquaguard-2 (货号: 01-916-1E 50ml, 稀释500倍使用),可以有效消毒任何形式的水浴环境。
ATP发光法,ATP是细胞的能量直接来源,ATP发光法是藉由检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素(Luciferin)与荧光素酶(Luciferase),以细胞内含的ATP为能量来源,发生氧化反应产生生物冷光,因此可通过监测冷光光度,来对应ATP含量并判断细胞增殖状况。EdU检测法,EdU原理跟BrdU检测法很像,并加入能与Edu反应的荧光染料,即可利用检测荧光值侦测应用于细胞增殖,或在细胞***级别作为标记跟踪等研究,实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。
细胞***的检测:1.DNA损伤检测,在***细胞中会启动DNA 损伤信号p53,细胞***通路p53是被细胞DNA损伤而受到DNA损伤回应通路的激。2. β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal)活性染色,β-半乳糖苷酶主要位于溶酶体, 当细胞***发生时, 溶酶体膨胀并且增多, β-半乳糖苷酶明显积累在溶酶体中, 因此SA-β-gal染色法为检测细胞***普遍常见的指标。不过在一些特殊情况下,例如,饥饿引发的细胞休眠(quiescence)也会出现SA-β-gal染色呈现阳性。