细胞传代的一般方法？
开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和***是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血X清、庆大溶液（1 万单位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS 洗液。
用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至
少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱
操作步骤：镜检细胞，RCCS，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可X疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内，加入灭活小牛血X清10m1，庆大溶液0.3m1，7.5%碳酸氢钠溶液3ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，RCCS-4H，置于37±1℃孵箱培养。约2～4 天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。
RCCS三维细胞培养系统的应用？
1取材 在无菌环境下从机体取出某种***细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的***细胞的首1次培养称为原代培养。2培养 将取得的***细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，RCCS-3H，以一定的冷却速度冻存，RCCS-D，终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
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