





RPA与LAMP对比
LAMP:环介导等温扩增法的特征是针对目标DNA链上的六个区段设计四个不同的引物然后再利用链置换反应在一定温度下进行反应。反应只需要把***模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃)、经一个步骤即可完成。
RPA:主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。
重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物***了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。
RPA技术犀利在何处
常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤,而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的温度在37°C - 42°C之间,无需变性,在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要温控设备,RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。
据介绍,RPA检测的灵敏度很高,能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平,从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理,适用于无法提取核酸的实地检测。
即用型RPA检测***盒
客户采用RPA技术,可以根据自身需求开发自己的检测方法。在不同开发阶段所提供的这些即用型***盒内含有一整套用于检测主要食物病原体靶标的通用RPA***组分,灵活易用。
TwistDx公司曾经开发出系列即用型RPA检测***盒。例如,TwistAmp? exo ***盒为用户提供了一个exo***盒,加上用于实时荧光检测的引物探针及阳性模板,该模板可与每次检测反应配合使用。TwistGlow? 沙门氏菌(即用型,可用于实时荧光检测)和 TwistFlow? 沙门氏菌(即用型,可用于终点侧流检测)***盒均为用户提供包含靶***及内部质控引物探针反应组分、一个两步走的细胞裂解样本制备方法,以及可与每次***盒反应配合使用的模板。
目前,TwistDx公司在被雅培收购后,停产了部分产品,包括:TwistAmp Basic RT***盒、TwistAmp exo RT***盒、TwistAmp Liquid Basic RT ***盒和TwistAmp Liquid exo RT***盒、食品安全***盒(包括TwistAmp exo 弯曲菌属检测***盒(TwistAmp exo Campylobacter)、TwistAmp exo 单核细胞***李斯特菌检测***盒(TwistAmp exo ListeriaM)、TwistGlow?沙门氏菌检测***盒(TwistGlow?Salmonella)和TwistFlow 沙门氏菌检测***盒(TwistFlow?Salmonella )共四种)。