





客户提供:
1、FAA固定液固定的样品。取材要求:固定液预冷,取材冰上操作。材料大小8 mm×5 mm×3 mm左右。取材后抽真空5~20 min。该步骤重复至材料沉入玻璃瓶底部, 使样品充分固定后,4 ℃过夜。
2、需要研究的***信息。
良好的前期标本制备十分重要,这点对于采用秋水仙素刺激得到中期染色体分裂象尤为重要。刺激时间过短或过长都会影响实验观察,因此需要耐心摸索作用时间。
蛋白酶K的作用浓度。浓度高了极易影响细胞核形态,造成模糊不清,浓度低了则探针不易进入细胞核,杂交率大大降低。石蜡切片一般要达到10-30min,不要超过半小时,一般来说,20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min足矣。
杂交条件一般是37℃避光湿盒过夜。至少温度要严格控制在37-40℃,过高或者过低都是不适合的。孵育时间也不要无限延长,一般18-20h就肯定够了,时间过久会造成自动解链,造成信号降低。
漂洗液的温度控制。很多人都觉得这个无所谓。小编个人认为FISH实验是一个对温度非常敏感的实验。保证漂洗液温度为37℃而不是室温,可能对于整个实验有比较良好的影响。