在桶内装入适量水（以蒸沸6小时不干为度）。桶底呈三角形铺三叠砖块（或木块），要求砖块高出水面厘米以上，三叠砖块高度一致。然后，将已开有小孔的桶盖（蒸架）放到砖块上。注意不要用钢筋做三脚架，灭菌车***制造，以免全部重量集中在三点上，桶底容易损坏。将要灭菌的瓶（或袋）放到上述蒸架上面。瓶（或袋）装好后，灭菌车，桶中间插一木（或竹）棒，然后盖上薄膜，依靠木棒的支撑作用而使覆盖的薄膜呈覆锅形，有利于灭菌时蒸馏水冷却后淌向桶边，减少瓶塞潮湿的弊病。
灭菌锅内加水时应注意水位在挡水板下为宜。使用的水源应该是使用去离子水。 使用完高压灭菌锅设备以后需要注意的事项： 旋转手轮、拉开外桶盖、取出灭菌网篮、取出挡水板。 关紧放水阀，在外桶内加入清水，水位至灭菌桶搁脚处（挡水板下）。连续使用时，灭菌车定制，必须在每次灭菌后补足水量。 放回挡水板，把灭菌网篮放入外桶。灭菌的物品予以妥善包扎，有顺序的放入灭菌网篮内。相互之间留有间隙，有利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果。
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