




安普未来生物 MIRA 助力新冠疫情一线!
新型冠状病毒现在准确的确诊方法是核酸检测,但传统的荧光定量PCR方法需要采取病毒提取、反转录、荧光定量扩增等多步操作,完成整个检测实验长达3小时以上。并且该病毒有可能通过气溶胶传播,实验中病毒的核酸提取过程需要多步骤处理标本,操作复杂,检测人员被染的风险几率高。为了很快控制住疫情,我们迫切需要一种更安全、简便、快速的检测方法,这就是安普未来的新型冠状病毒恒温快速检测方法。
潍坊安普未来生物科技有限公司创业团队,历经十年自主研发出多酶恒温快速扩增(即Multienzyme Isothermal Rapid Amplification ,以下简称MIRA)技术,这是一种恒温核酸快速扩增技术,依靠多种功能蛋白在常温下完成核酸的快速扩增,可替代目前的聚合酶链反应 (PCR)技术。
除了前述的胶体金跨速核酸检测法以外,公司还具备荧光型检测方法。结合本公司所独创的超快速核酸提取***(5分钟提取DNA/RNA用于扩增)和荧光检测仪,可将整个核酸检测实验的全部时间缩短至8至20分钟内完成。
安普未来的解决方案操作十分简单
1核酸提取
直接取咽拭子等样品放入管A中(含裂解液,可灭活病毒);
管A放入95℃-100℃水浴或者金属浴10分钟;2扩增反应
向含有冻干***(冻干***包含了生物酶与各反应组分;可常温运输,便捷)的反应管中加入42.5 μL R buffer使其复溶;
取核酸提取步骤中提取完成的样本3-5μL 加入反应管;
然后在反应管加入2.5μL启动B buffer,盖上盖充分混匀后上机反应。反应温度为42℃,时长20min,实时显示荧光扩增曲线。其结果分析与荧光定量PCR类似,简单易懂。
多酶恒温快速扩增技术在大动物分子诊断领域的应用
————MIRA助力猪疫病的检测
2018年10月开始的非洲猪疫情,很大的冲击了中国生猪养殖市场和屠宰市场。造成了市场格局的大幅变化,也提升了***和民众对畜牧养殖的认识和重视,从简单的关注食品安全开始向关注食材原料安全转移。随着疫情的逐渐缓和,疫情的检测主体已经从生猪检测向环境监控转化。例如,厂区周边取样、运送生猪的车辆取样、进出人员的衣物取样等。这些预防性检测已占据养殖场日常检测量的80%以上,因此对养殖过程中诊断提出了更高的要求,需要便携、快捷、易操作、便于临场检测的新技术,而传统PCR检测技术存在检测时间长、人员技术要求高和设备昂贵等特点,在实际应用上,越来越不适合畜牧养殖等非***区域的检测需求。而我司的MIRA技术恰恰可以弥补上述缺陷。MIRA多酶恒温快速扩增技术,模仿细胞内核酸过程,在体外、常温、恒温的状态下实现核酸的指数式扩增。其核心就是利用多酶系统替代以往利用精密温控设备(PCR仪)才能完成的变性、退火、延伸等流程。
恒温快速扩增***盒操作步骤
提前30分钟将***盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1) 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2) 每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3) 向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4) 然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5) 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins;
6) 反应结束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中,混合均匀后,将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡,5 mins内观察质控线与检测线判读结果。