




突破传统桎梏,将分子检测带入一个新领域
如何将传统分子检测方法变的更加简单易懂、操作方便和快速精准。一直是分子检测行业的一大课题。各个厂家和科研院所都在这方面投入了大量的时间和金钱。
安普未来有幸在该领域完成了突破和革新。在荧光检测领域,自主研发的MIRA技术将60分钟以上的核酸扩增阶段,缩短到20分钟。其开发了“核酸胶体金试纸条检测法”,可彻底抛弃掉高昂的检测设备,仅需配备简单的温控仪器即可(如金属浴、水浴锅等),甚至42°温水和利用***温度亦可完成扩增反应,且核酸扩增时间进一步缩短到10分钟不到。其结果的准确率与传统PCR检测方式准确率一致。
自主研发用时,引物设计需注意!
核酸试纸条三明治夹心检验法探针设计:在上下游引物中间设计一条长度为46-52nt与目的片段互补序列;5’端修饰一个抗原标记(典型FAM);5’端和3’端中间位置标记一个dSpacer(THF);3’端标记一个修饰基团,如胺基、生物素或C3-Spacer,同时要求下游引物5’端标记一个修饰基团。
该方法极其适用于现场核酸检测。可应用于初筛、食品安全、宠物***检测等各种不具备完整分子检测条件下的核酸测试。对操作人员***水平要求低,检测结果可信度高。
恒温快速扩增***盒原理概述
本***盒基于一种常温恒温核酸快速扩 增技术:在常温恒温条件下,重组酶和引物形成蛋白单链核苷酸的复合体Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白SSB的帮助下,***双链DNA模板,在***位点形成D-loop区域,并开始对DNA双链进行扫描;待找到与引|物互补的目的区域后,复合体Rec/ssDNA解体的同时,聚合酶也结合到引|物的3"末端,开始链的延伸。本***盒在39。C下,依赖核酸外切酶的作用,加入根据模版设计的特异的分子探针,使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。
恒温快速扩增***盒操作步骤
提前30分钟将***盒所需组分取出,室温融化,震荡混匀。
1) 每个干粉反应管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需完全融化混匀,否则会对实验效果产生影响);
2) 每个反应管分别加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探针(引物和探针浓度为10 μM,对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中);
3) 向反应管中依次加入11.5 μL ddH2O和2 μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积,并相应调整加入的ddH2O体积,至模板与ddH2O总体积为13.5 μL);
4) 然后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(对于多个反应,建议将B buffer加至反应管的盖子内侧,上下颠倒反应管8-10次混匀);
5) 混匀后,将反应液甩(或快速离心)至管子底部,然后立即将反应管放入恒温设备中37-39 oC孵育8-12 mins;
6) 反应结束后,取10 μL加入含有190 μL ddH2O的离心管中,混合均匀后,将胶体金试纸条的样品端插入离心管中平衡,5 mins内观察质控线与检测线判读结果。